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上海熒光定量PCR檢測
上海熒光定量PCR檢測 價格:  元(人民幣) 產(chǎn)地:本地
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產(chǎn)品簡介

產(chǎn)地類別  
國產(chǎn) 

上海熒光定量PCR檢測于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應(yīng)用;實時熒光定量

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上海熒光定量PCR檢測的方法:

  熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應(yīng)的可分為特異類和非特異類兩類,特異性檢測方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產(chǎn)物;而非特異性檢測方法是在在PCR反應(yīng)體系中,加入過量熒光染料,熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射出熒光信號。前者由于增加了探針的識別步驟,特異性更高,但后者則簡便易行。

上海熒光定量PCR檢測zui常用的方法是DNA結(jié)合染料SYBR GreenⅠ的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法,在這里主要介紹這2種方法,其它方法請參考其它熒光定量PCR資料。

  1、非特異性SYBR Green I染料法

  SYBR Green I是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長的染料(結(jié)合示意圖),在游離狀態(tài)下,SYBR Green I發(fā)出微弱的熒光,但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后,熒光大大增強(qiáng)(作用機(jī)理圖)。因此,SYBR Green I的熒光信號強(qiáng)度與雙鏈DNA的數(shù)量相關(guān),可以根據(jù)熒光信號檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。

  2、特異性Taqman水解探針法

  Taqman熒光定量技術(shù)是以Taqman熒光探針為基礎(chǔ),Taqman熒光探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個熒光發(fā)射基團(tuán)和一個熒光淬滅基團(tuán)。探針完整時,發(fā)射基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;

PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使熒光發(fā)射基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。從而實現(xiàn)定量(如下圖)。常用的熒光基團(tuán)是FAM, TET, VIC, HEX。

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