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產(chǎn)品簡介
| 品牌 |
科樂福clover |
產(chǎn)地類別 |
進口 |
| 應用領域 |
環(huán)保,食品,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
中檢維康iELisa 黃曲霉毒素ELISA試劑盒。本產(chǎn)品是利用抗體-抗原免疫反應檢測原理建立的一種定量檢測試劑盒。加入黃曲霉毒素M1（AFLA M1）標準品或樣品后，黃曲霉毒素M1與微孔中的抗體相結(jié)合。
詳情介紹
中檢維康iELisa黃曲霉毒素ELISA試劑盒 - 概要
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黃曲霉毒素是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產(chǎn)物，它們具有很強的致癌性. 黃曲霉毒素M<蘇b>1是黃曲霉毒素B<蘇b>1的代謝產(chǎn)物。經(jīng)攝入含有黃曲霉毒素B<蘇b>1飼料的奶牛產(chǎn)出的牛奶中，其中便含有黃曲霉毒素M<蘇b>1。由于黃曲霉毒素M<蘇b>1相當穩(wěn)定，巴氏滅菌法也無法將其殺滅，所以檢測黃曲霉毒素M<蘇b>1不僅要在飼料原料中檢測，而且在終產(chǎn)品中的含量也需要進行測定。用iELisa 黃曲霉毒素M<蘇b>1快速檢測試劑盒可以準確地檢測牛奶、酸奶、奶酪和奶粉中的黃曲霉毒素 M<蘇b>1。 - 原理
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本產(chǎn)品是利用抗體-抗原免疫反應檢測原理建立的一種定量檢測試劑盒。加入黃曲霉毒素M<蘇b>1（AFLA M<蘇b>1）標準品或樣品后，黃曲霉毒素M<蘇b>1與微孔中的抗體相結(jié)合。洗去沒有結(jié)合的黃曲霉毒素M<蘇b>1，加入酶標抗原，與黃曲霉毒素M<蘇b>1與抗體沒有結(jié)合的部位相結(jié)合。洗去沒有結(jié)合的酶標抗原，加入TMB底物顯藍色，加入終止液后顏色由藍變黃，用酶標儀在450nm處檢測，吸光值與樣品中黃曲霉毒素M<蘇b>1含量成負相關，與標準曲線比較即可得出黃曲霉毒素M<蘇b>1的含量。 3. 試劑盒的組成 - 包被有抗體的96微孔板：1塊（96 孔，12 條×8 孔）
- AFM1標準品：0 ng/mL 、0.05 ng/mL、0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL：
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1 瓶 × 1.0mL - AF-M1酶標抗原： 1 瓶 × 15mL
- 10× 濃縮洗滌液： 1 瓶 × 50mL
- AF-M1稀釋緩沖液: 1 瓶 × 50mL
- 顯色底物液： 1 瓶 ×12mL
- 反應終止液： 1 瓶 × 13mL
- 試劑盒說明書
- 質(zhì)控報告
- 需要的儀器、試劑
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1）儀器 - 酶標儀450nm（iELisa全自動酶標儀或相當者）
- 微量移液器：20μL-200μL單道，100μL-1000μL單道, 50μL-300μL八道
- 高速離心機
- 酶標板振蕩器
- 渦旋混合器
- 振蕩器
- 蒸發(fā)設備、恒溫箱
- 100mL量筒
- 計時器
- 天平：感量0.01g
- 離心管1.5mL、50mL
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2）試劑 - 甲醇、正庚烷、二氯甲烷
- 樣品處理
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5.1 牛奶： - 取牛奶1.0 mL樣品，用離心機（4000RPM）離心10min.。
- 離心后用移液器徹底去除上層奶油。
- 取200μL下層脫脂牛奶，加入200μLAF-M<蘇b>1稀釋緩沖液（1:1）稀釋。
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稀釋倍數(shù)：2 5.2 酸奶： - 取酸奶樣品2.0g，用離心機（4000RPM）離心10分鐘。（如沒有冷凍離心機，可將樣品先冷卻到10℃，再離心）
- 離心后，取200μL上層澄清液于1.5mL離心管中，加入200μL AF-M<蘇b>1稀釋緩沖液（1:1）稀釋，渦旋混合器混勻。
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稀釋倍數(shù)：2 5.3 奶粉： - 用天平稱取2.0g奶粉到錐形瓶中，再加入10mL 50℃左右的純水（復原乳）。
- 用力振蕩3分鐘.，使充分溶解。
- 按照5.1牛奶樣品處理步驟進行。
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稀釋倍數(shù)：10 （檢測范圍：0.5---5 ppb） 5.4 奶粉（高靈敏度）： - 用天平稱取2.0g奶粉到錐形瓶中，再加入5mL 50℃左右的純水（復原乳）。
- 用力振蕩3分鐘.，使充分溶解。
- 按照5.1牛奶樣品處理步驟進行。
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稀釋倍數(shù)為5（檢測范圍：0.25---2.5 ppb） 5.5 奶酪： - 用天平稱取2.0g粉碎的奶酪放入離心瓶中，加入40.0mL二氯甲烷，充分溶解混勻后，劇烈振蕩15分鐘.。
- 過濾，取10.0mL，60℃氮氣吹干。
- 分別加入0.5mL甲醇、0.5mL PBS、1.0mL庚烷，復容。
- 3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘.。
- 完全去除上層庚烷。
- 取100μL下層提取液于1.5mL離心管中，加入400μL AF-M<蘇b>1稀釋緩沖液（1:4）稀釋，渦旋混合器混勻，取100μL用于檢測。
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稀釋倍數(shù)：10 6． 酶聯(lián)免疫分析程序 6.1測定之前注意事項 - 使用前將所有試劑平衡至室溫（20-25℃）。
- 使用后迅速將試劑放入2-8℃冷藏。
- 在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
- 所有溫育過程應避免陽光直射，并按要求用蓋板覆蓋住酶標板。
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6.2溶液的配制 洗滌液的配制：將濃縮洗滌液用純水稀釋10倍后使用。（例如：取10 mL 濃縮液+90 mL純水, 可以用于32孔的檢測）。 6.3測定程序 - 將足夠標準品和樣品所用數(shù)量的孔條插入酶標板架，標準品和樣品做兩個平行實驗，記錄下標準和樣品的位置。未使用的酶標板用鋁箔袋封好置2-8℃冷藏保存。
- 分別吸取100μL標準品和樣品加至相應的微孔（雙孔）中,，加蓋，室溫撫育50分鐘.。
- 倒出孔中的液體，每孔加入250μL稀釋好的洗滌液，置于酶標板振蕩器上振蕩30秒（或者手工振蕩），重復操作四次。洗完后用力在吸水紙上拍干。
- 每孔加入AF-M<蘇b>1酶標抗原100μL，加蓋，室溫撫育30分鐘.。
- 倒出孔中的液體，每孔加入250μL 稀釋好的洗滌液，置于酶標板振蕩器上振蕩30秒（或者手工振蕩），重復操作四次。洗完后用力在吸水紙上拍干。
- 每孔加入100μL顯色底物液，加蓋，室溫撫育10分鐘.。
- 每孔加入50μL反應終止液。
- 置于酶標儀中，振蕩混勻，在450nm處測定吸光度值（OD值），參考波長630nm。（iELisa全自動酶標儀可以直接讀出、打印濃度值）
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7. 結(jié)果判定 - 所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以di一個標準（0標準）的吸光度值（B<蘇b>0）再乘以100%，即百分吸光度值。
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| 百分吸光度值（%）＝ | B | ×100% | | B<蘇b>0 | 以黃曲霉M1標準品濃度值（ppb）為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。相對應每一個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。也可以用回歸方程法，計算出樣本溶液濃度。利用計算機專業(yè)軟件，更便于大量樣品的快速分析。 - 樣品的實際濃度為讀數(shù)結(jié)果乘以相應稀釋倍數(shù)。
- 如果測定值超出檢測范圍，樣品提取溶液按一定的比例用陰性牛奶樣品進行稀釋。
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8. 注意事項 - 室溫低于20℃或試劑及標本未回到室溫（20- 25℃）會導致數(shù)值偏低。
- 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥過久的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板排干后應立即進行下一步操作。
- 標準物質(zhì)和顯色液對光敏感，避免直接暴露在光線下。
- 混合要均勻，洗板要徹底（包括加樣品和標準液的時候都必需充分混合均勻）。
- 反應停止液為強酸性物質(zhì)，避免接觸皮膚。
- 不要使用過了有效期的試劑盒，也不要混合使用不同批次的試劑盒，這樣會引起測定結(jié)果不準確。
- 試劑盒的儲存條件是2-8℃，切勿冷凍。
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9. 檢測方法靈敏度、準確度、精密度 1）試劑盒靈敏度: 0.05ppb 2）檢測范圍：牛奶0.1---1.0 ppb 酸奶0.1---1.0 ppb 奶粉0.5---5.0ppb；0.25---2.5 ppb 奶酪0.5---5.0ppb 3）試劑盒變異系數(shù)：小于20%。 4）試劑盒準確度：回收率范圍在70%-120%之間。
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