MTT/噻唑藍(lán) 細(xì)胞增殖 細(xì)胞活性 藥物篩選
簡要介紹：
MTT商品名噻唑藍(lán)，是一種黃顏色的染料。MTT主要用途：
1．藥物（或其他處理方式）對體外培養(yǎng)的細(xì)胞活性的測定；
2．細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定。
MTT廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的藥物篩選、細(xì)胞活性試驗(yàn)以及腫瘤敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。
貨號：CT-MTT-1
包裝量：1.0克MTT粉末
儲存：+4°C，避光
MTT全稱為3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium
bromide，漢語化學(xué)名為 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)，是一種黃顏色的染料。在水中的溶解度為20 mM。
技術(shù)資料：
CAS No：298-93-1
分子量：414.32
分子式：C18H16N5SBr
純度：>98%
MTT主要有兩個用途：
1．藥物（或其他處理方式）對體外培養(yǎng)的細(xì)胞活性的測定；
2．細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定。
MTT實(shí)驗(yàn)的原理：
細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢（Formazan），并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞不能進(jìn)行這個反應(yīng)。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臢，用酶標(biāo)儀在570 nm波長處(490 nm
-570 nm之間都可以）測定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值（OD值）來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)（如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越。。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的藥物篩選、細(xì)胞活性試驗(yàn)以及腫瘤敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。
MTT實(shí)驗(yàn)方法（供參考）
一、MTT的配制
通常配制的MTT濃度為5 mg/ml。可以稱取MTT
0.5克，溶于100
ml的磷酸鹽緩沖液（PBS）或無酚紅的培養(yǎng)基中，用0.22
μm濾膜過濾以除去溶液里的細(xì)菌，放4℃ 避光保存，兩周內(nèi)用完。也可分裝后避光保存在-20℃長期保存，并避免反復(fù)凍融。在配制和保存的過程中，容器最好用鋁箔紙包住。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
A、貼壁細(xì)胞
1、收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，向96孔板每孔加入100ul鋪板，調(diào)節(jié)待測細(xì)胞密度使每孔含1000-10000個細(xì)胞，邊緣孔用無菌水或PBS填充。
2、在5%CO2，37℃條件下孵育。原則上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，或兩小時，或半天時間，或過夜。一般常在前一天下午鋪板，次日上午加藥。一般設(shè)5-7個藥物梯度，每孔100ul，一般設(shè)3個復(fù)孔即可，復(fù)孔越多結(jié)果越準(zhǔn)確。同時設(shè)置調(diào)零孔（僅含培養(yǎng)基和藥物溶解介質(zhì)）和對照孔（僅含細(xì)胞和藥物溶解介質(zhì)）。
3、置于5%CO2，37℃條件下，孵育時間根據(jù)藥物的作用特點(diǎn)來決定，一般24-72小時，中途可在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀況。
4、每孔加入20ul MTT溶液（5
mg/ml，即0.5%
MTT），37℃繼續(xù)培養(yǎng)3-4小時。若藥物能夠與MTT反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS洗2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5、終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。
6、每孔加入150 ul DMSO，置搖床上低速振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解。在570nm（可用630nm校準(zhǔn)）測量各孔的吸光值。
B、懸浮細(xì)胞
1、收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度1E6/ml，依次將①細(xì)胞懸液50ul（即5E4cell/孔），②待檢測藥物50ul，共100ul加入到96孔板（邊緣孔用無菌水或PBS填充）。一般設(shè)5-7個藥物梯度，一般設(shè)3個復(fù)孔即可，復(fù)孔越多結(jié)果越準(zhǔn)確。同時設(shè)置調(diào)零孔（僅含培養(yǎng)基和藥物溶解介質(zhì)）和對照孔（僅含細(xì)胞和藥物溶解介質(zhì)）。
2、置于5% CO2，37 ℃條件下，孵育時間根據(jù)藥物的作用特點(diǎn)來決定，一般24-72小時，中途可在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀況。
3、每孔加入10 ul MTT溶液（5
mg/ml，即0.5%MTT），37℃繼續(xù)培養(yǎng)3-4 h。
4、離心（1000轉(zhuǎn)x10 min），小心吸掉上清，每孔加入150
μl
DMSO，置搖床上低速振蕩10
min，使結(jié)晶物充分溶解。在570
nm（可用630 nm校準(zhǔn)）測量各孔的吸光值。
注意事項(xiàng)
1、MTT法只能用來檢測細(xì)胞相對數(shù)和相對活力，但不能測定細(xì)胞絕對數(shù)。在用酶標(biāo)儀檢測結(jié)果的時候，為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，MTT 吸光值要控制在儀器的線性讀取范圍內(nèi)。
2、MTT最好現(xiàn)用現(xiàn)配，配制成5
mg/ml無菌過濾后，在4 ℃避光保存兩周內(nèi)有效，或在-20℃長期保存，避免反復(fù)凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光，以免分解。
3、保存的MTT溶液需要無菌，MTT對菌很敏感；往96孔板加時不避光也沒有關(guān)系，畢竟時間較短，不放心的話可以把操作臺上的照明燈關(guān)掉。
4、配制MTT時用PBS溶解,也有人用生理鹽水配，可用60
℃水浴助溶。
5、MTT的缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲臢產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲臢的有機(jī)溶劑對實(shí)驗(yàn)者也有損害。
6、MTT有致癌性，用的時候小心，為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作，最好戴透明的薄膜PE手套。
7、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究使用。
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