有色溶液對(duì)光線有選擇性的吸收作用，不同物質(zhì)由于其分子結(jié)構(gòu)不同，對(duì)不同波長(zhǎng)線的吸收能力也不同，因此，每種物質(zhì)都具有其特異的吸收光譜。有些無色溶液，光雖對(duì)可見光無吸收作光光度技術(shù)吸收用，但所含物質(zhì)可以吸收特定波長(zhǎng)的紫外線或紅外線。
一、光的基本知識(shí)
光是由光量子組成的，具有二重性，即不連續(xù)的微粒和連續(xù)的波動(dòng)性。波長(zhǎng)和頻率是光的波動(dòng)性和特征，可用下式表示：
�。�
λ＝───
�。�
式中λ為波長(zhǎng)，具有相同的振動(dòng)相位的相鄰兩點(diǎn)間的距離叫波長(zhǎng)。Ｖ為頻率，即每秒鐘振動(dòng)次數(shù)。Ｃ為光速等于299770千米／秒。光屬于電磁波。自然界中存在各種不同波長(zhǎng)的電磁波，列成表1-1所示的波譜圖。
分光光度法所使用的光譜范圍在200nm-10μ（1μ= 1, 000nm
）之間。其中200nm－400nm為紫外光區(qū)，400nm－760nm為可見光區(qū)，760nm－10,000nm為紅外光區(qū)。
二、朗伯－比爾（Lambert-Beer）定律
朗伯－比爾定律是比色分析的基本原理，這個(gè)定律是有色溶液對(duì)單色光的吸收程度與溶液及液層厚度間的定量關(guān)系。此定律是由朗伯定律和比爾定律歸納而得。
1.朗伯定律
一束單色光通過溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的強(qiáng)度就要減弱：若溶液濃度不變，則溶液的厚度愈大（即光在溶液中所經(jīng)過的途徑愈長(zhǎng)），光的強(qiáng)度減低也愈顯著。
2.朗伯－比爾定律
如果同時(shí)考慮吸收層的厚度和溶液濃度對(duì)光吸收的影響，則必然將朗伯定律和比爾定律合并起來，吸光度與溶液的濃度和液層的厚度的乘積成正比，這就是朗伯－比爾定律。
三、測(cè)定溶液中物質(zhì)的含量
光度法都可用于測(cè)定溶液中物質(zhì)的含量。測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度已知的溶液）和未知液（濃度待測(cè)定的溶液）的吸光度，進(jìn)行比較，測(cè)出不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在選定的濃度范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是一條直線，然后測(cè)定出未知液的吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到其相對(duì)應(yīng)的濃度。
