根據(jù)2002年版《消毒技術規(guī)范》的要求，現(xiàn)將我院消毒滅菌效果監(jiān)測、環(huán)境微生學監(jiān)測的采樣方法、結(jié)果判定、質(zhì)控標準等規(guī)范如下：
環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測：包括空氣、物體表面、醫(yī)務人員手的監(jiān)測
采樣及檢查原則：采樣應具有一定數(shù)量和代表性，采樣后必須盡快對樣品按要求指標進行檢測，送檢時間不得﹥6小時，若樣品保存在冰箱內(nèi)送檢時間不得﹥24小時。
醫(yī)院室內(nèi)空氣的消毒
I 類環(huán)境：包括層流潔凈手術室和層流潔凈病房，要求空氣中的細菌總數(shù)≤10 cfu/m³。
II 類環(huán)境：包括普通手術室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護性、供應室潔凈區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房。要求空氣中的細菌總數(shù)≤200 cfu/m³。
III類環(huán)境：包括兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、急診室、化驗室、各類普通病室和房間，要求空氣中的細菌總數(shù)≤500 cfu/m³。
1、 采樣時間：消毒處理后，操作前進行采樣。
2、采樣方法：平板暴露法
（1）布點方法：室內(nèi)面積≤30 m²;，設內(nèi)、中、外對角線3點，內(nèi)外兩點距墻1米；室內(nèi)面積＞30 m²，設東、西、南、北4角及中央5點，其中東、西、南、北均距墻1米。
（2）采樣方法：將直徑為9cm普通營養(yǎng)瓊脂平板放在室內(nèi)各采樣點處，采樣高度為距地面1.5米，采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露5分鐘，蓋好立即送檢。
3、計算公式：
空氣細菌菌落總數(shù)（cfu/ m³）=50000N∕（A × T）
式中A為平板面積（cm²）；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落數(shù)（cfu）。平板面積：半徑²× π （π即3.14） 那么此公式可以簡化為N×157。
4、注意事項：采樣前，關好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進行采樣。
5、質(zhì)控標準（結(jié)果判定）：
Ⅰ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤10cfu∕m³ (或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；
Ⅱ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤200cfu∕m³ (或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；
Ⅲ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤500cfu∕m³ (或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。
物體和環(huán)境表面消毒
I 類環(huán)境：包括層流潔凈手術室和層流潔凈病房。
II 類環(huán)境：包括普通手術室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護性、供應室潔凈區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房。
I、II類環(huán)境要求物體表面的細菌總數(shù)≤5 cfu/cm²。
III類環(huán)境：包括兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、急診室、化驗室、各類普通病室和房間，要求空氣中的細菌總數(shù)≤10 cfu/cm²。
IV類環(huán)境：包括傳染病科及病房。要求物體表面細菌總數(shù)≤15 cfu/cm²。
1、采樣時間:在消毒處理后進行采樣。（或是在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣）
2、采樣面積：被采表面＜100/ cm²，取全部表面；被采表面>100 cm²，取100 cm²。小型物體表面的結(jié)果計算，用cfu/件表示。
3、采樣方法：
① 壓印采樣法：采用一直徑為5.6 cm（面積約為25 cm²）的消毒塑料專用平皿，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并使培養(yǎng)基高出平皿邊緣1-2mm,凝固后置4℃冰箱保存待用。采樣時將平皿上的瓊脂表面直接壓貼在被檢物體表面10-20秒后送檢。
置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48小時，計算并鑒定細菌。
②用5cm×5cm的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積>100 cm²，連續(xù)采樣4個，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子投入10 ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。
4、采樣結(jié)果計算方法：
物體表面細菌 平皿上菌落平均數(shù) ×采樣液稀釋倍數(shù)
菌落總數(shù)(cfu/cm²)＝─────────────────
采樣面積(cm²)
采樣液稀釋倍數(shù)為10：（棉拭子投入10 ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)）
5、質(zhì)控標準：
Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤5cfu∕cm²，并未檢出致病菌為消毒合格。
Ⅲ類區(qū)域細菌：總數(shù)≤10cfu∕cm²，并未檢出致病菌為消毒合格。
Ⅳ類區(qū)域細菌：總數(shù)≤15cfu∕cm²，并未檢出致病菌為消毒合格。
母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、 新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏菌。
手和皮膚黏膜消毒：
1、采樣時間：在接觸病人和從事醫(yī)療活動前進行采樣或消毒后立即采樣。
2、采樣面積及方法：
（1）手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面積約 30 cm²)，并轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入 10ml 含相應中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。
（2）皮膚粘膜采樣：用5cm×5cm的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10 ml含相應中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。若表面不足5cm×5cm，可用相應面積的規(guī)格板采樣。
3、檢測方法：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內(nèi)加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。
4、采樣結(jié)果計算方法：
平板上菌落的平均數(shù) ×采樣液 稀釋倍數(shù)
細菌總數(shù)(cfu/ cm²) ＝ ─────────────────────────
采樣面積(cm²)
其中采樣面積即為30×2。
5、質(zhì)控標準：
Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)≤5cfu∕cm²，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。
Ⅲ類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)≤10cfu∕cm²，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。
Ⅳ類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)≤15cfu∕cm²，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。
母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。
皮膚粘膜：參照手的衛(wèi)生學標準執(zhí)行。
醫(yī)療用品衛(wèi)生標準：
1、 進入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無菌。
2、 接觸粘膜的醫(yī)療用品，細菌菌落總數(shù)應≤20cfu∕g或100 cm²，致病性微生物不得檢出。
3、 接觸皮膚的醫(yī)療用品，細菌菌落總數(shù)應≤200cfu∕g或100 cm²，致病性微生物不得檢出。
使用中消毒劑與無菌器械保存液衛(wèi)生標準：
1、 使用中消毒劑：細菌菌落總數(shù)應≤100cfu∕ml，致病性微生物不得檢出。
2、 無菌器械保存液：必須無菌。